小サンプルの酵母形質転換(5cmプレート10sample分；チューブ法)
1.
2mlのYPADもしくは選択培地で前培養O/N
2.
前培養液の菌体濃度測定し、100mlのフラスコに10mlのYPAD液体培地を入れOD600＝0.1~0.2となるように植菌
3.
OD600＝0.4〜0.8程度になるまで30℃,90rpmで振とう培養する(3〜5時間)。
4.
50mlファルコンチューブに移し、3000rpm,2min遠心して集菌し、無菌的に培地を除く。
5.
15mlの滅菌水で洗浄し再び集菌する。
6.
水を完全にのぞいた後、1mlの0.1M酢酸リチウムにvortexで懸濁し、懸濁液を1.5mlエッペンチューブに移す。
7.
12,000rpm,5sec遠心して上清を除く。
8.
500μlの0.1M酢酸リチウムに再度vortexで懸濁し、この懸濁液をサンプル数分の1.5
mlエッペンチューブに50μlづつ分注する。
9.
12,000rpm,5sec遠心して上清を除く。
10.
以下の溶液を2本のチューブにそれぞれ加え、ボルテックスでよく懸濁する。
50%PEG(w/v) 240μl
1M酢酸リチウム 36μl
ssDNA(2.0mg/ml) 25μl
滅菌水
25μl
11.
30℃で30min静置。
12.
DMSOを40μlづつ加え上下転倒する。
13.
ヒートブロックを用いて42℃で20分熱処理をする。3〜5分おきに軽く撹拌する。
14.
遠心後上清を完全に捨て、適当量のYPADに懸濁し、12,000rpm,5sec遠心して上清を除く。
15.
1mlのYPDAに再度懸濁し、30℃,1hour保温。
16.
遠心後、上清を除いて40μlの滅菌水に懸濁し選択培地に植菌する。