多サンプルの酵母形質転換(5cmプレート100sample分)

1. 5〜10mlのYPADもしくは選択培地で前培養O/N

2. 前培養液の菌体濃度測定し、300mlのフラスコに100mlのYPAD液体培地を入れOD₆₀₀＝0.1~0.2となるように植菌

3. OD₆₀₀＝0.4〜0.8程度になるまで30℃,90rpmで振とう培養する(3〜5時間)。

4. 2本の50mlファルコンチューブに移し、3000rpm,2min遠心して集菌し、無菌的に培地を除く。

5. 1本のチューブにつき20mlの滅菌水で洗浄し再び集菌する。

6. 水を完全にのぞいた後、2mlの0.1M酢酸リチウムにvortexで懸濁し、3000rpm,2min遠心して上清を除く。

7. 以下の溶液を2本のチューブにそれぞれ加え、ボルテックスでよく懸濁する。

50%PEG(w/v)　　　　 　6ml

1M酢酸リチウム　　　 900μl

ssDNA(2.0mg/ml)　     625μl

DMSO                  1ml

滅菌水　　　  1250-(X×50)μl

8. 200-X μlずつ96穴プレートに分注。

9. 各ウェルにDNA液X μl加える。

10. 液漏れのないようにしっかりとシールし30℃で30min静置。

11. 恒温機を用い42℃で20分熱処理をする。3〜5分おきに軽く撹拌する。

12. 遠心後上清を完全に捨て、200μlのYPD液体培地に懸濁後、30℃,1hour保温。

13. 遠心後、上清を除いて40μlの滅菌水に懸濁し選択培地に植菌する。