グリセロールストック作成プロトコール

※あらかじめキムタオルをアルミホイルで包み、A/Cし、しっかりと乾燥させておく。

※あらかじめ」Glycerol培地を用意しておく。

培地の組成は以下のとおりである。以下の組成は1lの組成。

Yeast Nitrogen Base　　　　　　6.7g

Drop out mix　　　　　　　　　 1.82g

アデニン　　　　　　　　　　　 0.4g

Saccinic Acid Buffer　　　　　　50ml

グルコース　　　　　　　　　　 20g

グリセロール　　　　　　　　　 100ml

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

　　　　　　　　　 Up to　　850ml

これを85mlずつ小ビンに分注し、A/Cをして、4℃で保存する。利用時にDMSO 15ml、Amp 100ulを加えて利用する。

1. マイクロタイタープレートに100ul、ディープウェルプレートに800ulのSD-glc-Ura＋Ampを加える。

2. マイクロタイタープレートにつまようじで集菌した酵母を溶かす。

利用する酵母はコンタミしていないよく育ったプレートの酵母を利用する。

3. 酵母を溶かしたSD-glc-Ura溶液を、マイクロタイタープレートから、ディープウェルプレートに10ul植菌し、30℃、150rpmで翌日昼まで振盪培養する。

4. 3000rpm、RTで10分遠心し、上清をタッパーに捨てる。

5. あらかじめA/Cしたキムタオルでディープウェルプレートの水気をしっかりと除く。

※一度水気をふき取った箇所で再度水気を除くとコンタミするので、複数枚キムタオルを用意しておく。

6. シールして、壁面に付着した水滴を除くために軽く遠心にかける。

7. SD-glc-Glycerol培地を96穴プレート保存の場合は250ul、1.5mlエッペンチューブ保存の場合は1.5ml加える。

8. シールして、軽くボルテックスで懸濁する。

9. 壁面に付着した水滴を除くために軽く遠心にかける。

10. ディープウェルプレートから96穴プレート保存の場合はウェルプレートに、エッペンチューブ保存の場合は1.5mlエッペンチューブに全量分注する。

11. シールして、壁面に付着した水滴を除くために軽く遠心にかける。

12. 保存用の上ぶたをして、ラベルをはり、-80℃で水平にして保存する。