SD培地の作り方
アミノ酸を抜くことで選択性を持たせることができる培地をSD培地という。グルコースを使うものはSC、ガラクトースを使うものはSGと呼ぶ。
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SC[SG]培地(g/250ml) |
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Yeast Nitrogen base w/o Amino acid(Sigma) |
1.68 |
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drop out Mix(後述) |
0.35 |
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Adenine(Wako) |
0.4 |
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Leucine(Nacalai tesque)
(後述) |
5ml |
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Tryptophan(Nacalai tesque) (後述) |
2.5ml |
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Uracil(Wako) (後述) |
5ml |
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Histidine(Nacalai tesque)
(後述) |
250μl |
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Agar(Nacalai tesque) |
5 |
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1M Succinic/Tris buffer(後述) |
12.5ml |
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20% Glucose(Wako)、[Galactose(Sigma)] |
25ml |
※グルコース（ガラクトース）以外を混合してオートクレーブした後に、グルコース（ガラクトース）をフィルター滅菌して混合。
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SC(SG)-ura培地 (g/250ml) |
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完全培地のうち、Uracil以外を用いて作成する。 |
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各種アミノ酸溶液の組成 |
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Uracil(Wako) |
0.152
g/40ml |
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Tryptophan(Nacalai tesque) |
0.152
g/20ml |
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Leucine(Nacalai tesque) |
0.79
g/40ml |
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Histidine hydrochloride monohydrate (Nacalai tesque) |
0.513
g/5ml |
※それぞれ個別に作成した。Uracilは常温、それ以外は4℃で保存した。
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dropout
mix(g) |
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Adenine(Nacalai tesque) |
0.25 |
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Inositol(Nacalai tesque) |
1 |
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Alanin(Nacalai tesque) |
1 |
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Arginine(Nacalai tesque) |
1 |
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Asparagine monohydrate(Wako) |
1.136 |
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Aspartic Acid(Nacalai tesque) |
1 |
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Cysteine(Nacalai tesque) |
1 |
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Glutamine(Wako) |
1 |
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Glutamic Acid(Nacalai tesque) |
1 |
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Glycine(Nacalai tesque) |
1 |
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Isoleucine(Nacalai tesque) |
1 |
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Lysine monohydrochloride(Nacalai tesque) |
1.25 |
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Methionine(Nacalai tesque) |
1 |
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Phenylalanine(Nacalai tesque) |
1 |
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Proline(Nacalai tesque) |
1 |
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Serine(Nacalai tesque) |
1 |
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Threonine(Nacalai tesque) |
1 |
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Tyrosine(Nacalai tesque) |
1 |
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Valine(Nacalai tesque) |
1 |
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4-aminobenzoic acid(Nacalai tesque) |
0.1 |
※冷やした乳鉢と乳棒を使ってファインパウダーになるまですり潰し、4℃で保存。
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１M Sccinic/Tris base Buffer(g/500ml) |
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Tris (hydrocymethyl) aminomethane |
60.5 |
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Sccinic acid |
適量 |
※コハク酸をすこしずつ加えてpHを5.5に合わせた。