RNA抽出法（RNA easy plant mini kit）
1.
450μlのBuffer RLT
+ 4.5ul βメルカプトエタノールを調製する。…①
2.
10μl DNase（RNaseFREE）+70μl Buffer RDDをinversionで混合する。…②
3.
450μlの上記の溶液にサンプルを100mg（FW）加え、ホモジェナイザーで粉砕する。
もしくは乳鉢で粉砕した後、①に加える。
4.
Vortexしよく混ぜる。
5.
粉砕した溶液をQIA shredder spin colum (紫色）に加える。
6.
15000 rpm, 2 min RTで遠心する。
7.
上清を新しいチューブに移し1/2 量(本プルトコールでは225ul) の100%
エタノールを加えてピペッティングでよく混ぜる
8.
RNeasy mini Column （ピンク色）に溶液を加える
9.
15000 rpm, 15 sec RT
10.
フロー画分を捨てる
11.
350μl Buffer RW1を加える
12.
15000 rpm, 15 sec RT
13.
フロー画分を捨てる
14.
②をピンクカラムの中央にアプライし、卓上で15min静置
15.
350μl Buffer RW1を加える
16.
15000 rpm 15 sec RT
17.
液を捨てる
18.
クロロフィル・糖が多いサンプルの場合は15と16をもう一度繰り返す。
19.
500μl Buffer RPEを加える
20.
5000 rpm 15sec RT遠心する。
21.
タンパク質が多い場合は19と20をもう一度繰り返す。
22.
フロー画分を捨てる
23.
メンブレンを乾燥させるために10000rpmで2minRT遠心する。
24.
新しいチューブにカラムを移す
25.
30μl RNase
Free water を加え、1 min 静置する
26.
15000 rpm 1 min RTで遠心する。
27.
濃度定量・RNA電気泳動
28.
RNAは-80℃で保存。