イネカルスからのTotal RNA抽出

 

1.         試料100mgをマイクロチューブに計り取る。

2.         試料の10倍量のISOGEN(ニッポンジーン)を加える。

3.         ホモジェナイズペッスルで良く粉砕する。

4.         時々混和しながら、50℃で10分間インキュベーションする。

5.         200μlのクロロホルムを加え良く混和し、二分間室温に置く。

6.         15000rpm,15min,4℃遠心し、上清を新しい容器に移す。

7.         500μlのイソプロパノールを加えて転倒しよく混和する。

8.         15000rpm,10min,4℃遠心する

9.         上清を除去し70%エタノールを600μl加えて洗浄した。

10.      100μlDEPC水に溶解し10M LiCl25 μl加えてよく混和した後4で一晩静置した。

11.      遠心(15000rpm,10min,4)後、上清を除去して70%エタノールを加えてリンスした。

12.      遠心(15000rpm,5min,4)し、上清を完全に取り除く。

13.      その後30μlDEPC水に溶解させ、濃度測定及び電気泳動を行なった。