イネカルスからのTotal RNA抽出
1.
試料100mgをマイクロチューブに計り取る。
2.
試料の10倍量のISOGEN(ニッポンジーン)を加える。
3.
ホモジェナイズペッスルで良く粉砕する。
4.
時々混和しながら、50℃で10分間インキュベーションする。
5.
200μlのクロロホルムを加え良く混和し、二分間室温に置く。
6.
15000rpm,15min,4℃遠心し、上清を新しい容器に移す。
7.
500μlのイソプロパノールを加えて転倒しよく混和する。
8.
15000rpm,10min,4℃遠心する。
9.
上清を除去し70%エタノールを600μl加えて洗浄した。
10.
100μlのDEPC水に溶解し10M LiClを25 μl加えてよく混和した後4℃で一晩静置した。
11.
遠心(15000rpm,10min,4℃)後、上清を除去して70%エタノールを加えてリンスした。
12.
遠心(15000rpm,5min,4℃)し、上清を完全に取り除く。
13.
その後30μlのDEPC水に溶解させ、濃度測定及び電気泳動を行なった。