酵母からのプラスミド抽出方法(96サンプル同時)
1.
96穴ディープウェルプレートにSC培地を800μl入れる。
2.
96穴タイタープレート(平底)で前培養した菌液を100μl加える。
3.
6時間程度培養する。
4.
3000rpm 10min RT遠心する。
5.
トレーに上清を捨てる。キムタオルで余分な液を取り除く。
6.
200μl(Sol1)に10μlのZymolyaseを加え、210μlを菌体に加える。
7.
800rpmで5分攪拌。
8.
37℃で1時間反応
9.
Sol2に析出がないことを確認する。
10.
200μlのSol2を加えて、800rpmで5分攪拌。
11.
300μlのSok3を加えて、800rpmで5分攪拌。
12.
エッペンチューブに溶液を移す。
13.
13000rpmで10分間 RT
14.
上清をスピンカラムにデカンテーションでアプライ。
15.
吸引
16.
400μlのW1を加える。
17.
吸引
18.
600μlのWash ブッファーを加える。
19.
吸引
20.
スピンカラムを新しいチューブにセットして13000rpm RT 2min遠心
21.
50μlのDelutionバッファーを加えて2min放置。
22.
13000rpm 2min RTで遠心。
23.
プラスミド溶液として保存。