KODFXを用いたコロニーダイレクトPCR法

 

 FXは夾雑物に強いため、酵母のコロニーダイレクトPCRにはこれを用いる。単位はμl、計20μlの系。

この系は通常の半分以下のものである。10μl以下の系になるとうまく走らない。

 

2×Buffer

10

2mM dNTPs

4

各10p プライマー

2

MQ

3.8

KOD FX

0.2

計

20

 

上記のPreMIXを分注したのち、チップの先端でコロニーをつつき入れる。コロニーは肉眼でやっと見える程度ついていれば良い。

溶液が濁るほどの菌量は多すぎる。

 

94℃

2min

98℃

10sec

30

アニーリング

30sec

68℃

1min

4℃

∞

伸長反応は1kbp 1分で行う。