96サンプル同時グロースカーブ作成法

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

一日目

1. 夕方（18時頃）、マイクロタイタープレートにSD-galを100μlずつ分注し、固形培地に起こしてある菌を植菌し培養する。（over night）

2. 新品のマイクロタイタープレートを、培養プレート一枚につき最低1枚準備し、蓋の裏側に曇り止めにスイマーズデミスト（山本光学株式会社）一滴を指の腹で薄く伸ばす。

3. 曇り止めを塗ったマイクロタイタープレートをクリーンベンチ内でUVに当てover night滅菌する。

二日目（山木方式）

1. 前培養した菌液を滅菌したマイクロタイタープレート（Reuseで良い）に全量移し、OD₅₉₅を測定する。（この時サージカルテープを巻いて蓋をしたまま無菌的に測定し、測定に使用した菌液は以下の実験で使用する）

2. 測定したOD₅₉₅を元に菌液をOD₅₉₅=0.1にMQで薄める。

EX:前培菌液のOD₅₉₅=0.770のとき、MQ=67μl、菌液10μl

3. リザーバーに測定したい溶液（SD-gal + α）を準備し、曇り止めを塗ったマイクロタイタープレートに90μlずつ分注する。

4. 6でOD₅₉₅を0.1に合わせた菌液を10μlずつ、7のマイクロタイタープレートに植菌する。

5. マイクロタイタープレートをサージカルテープで封をし、0hrのOD₅₉₅を測定する。

6. 培養にかけ、定時的にOD₅₉₅を測定する。　(0hr, 3hr, 4hr, 5hr, 6hr…….)

二日目（秋廣方式）

1. 前培養した菌液を滅菌したマイクロタイタープレート（Reuseで良い）に全量移し、プレートにサージカルテープを巻く。OD₅₉₅を測定する。

2. 測定したOD₅₉₅の値を元に菌液をSD-Gal 培地にてOD₅₉₅=0.02に薄める。

EX:前培菌液のOD₅₉₅=0.770のとき、SD-Gal=750μl、菌液20μl

3. SD-gal ＋（＊2×終濃度のカドミウムやヒ素）溶液を50μlづつ、前日曇り止めを塗ったマイクロタイタープレートに分注する。

＊カドミウムの終濃度を50μMにしたいときは、100μMのSD-gal+Cd溶液を用意する。

4. 2,でOD₅₉₅を0.02に合わせた菌液を50μlずつ、3.に加える（これで培地の濃度は半分に、菌体量も半分になる。

5. マイクロタイタープレートにサージカルテープをして、0hrのOD₅₉₅を測定する。

6. 培養にかけ、定時的にOD₅₉₅を測定する。　(0hr, 3hr, 4hr, 5hr, 6hr…….)