ゲルからのDNA抽出

Gel Extraction 　使用キット：Mini Elute Gel Extraction Kit ( QIAGEN )

その他試薬：イソプロパノール

100％エタノール ( 開封時、BufferPEに加える )

3M酢酸ナトリウム ( pH5.0 )　( 状況により適宜 )

1. 清潔で鋭いメス（カッター）を用いてアガロースゲルからDNAフラグメントを含むゲルを切り取る。

2. チューブにゲルスライスを入れ、重量を測定する。

→カラムの処理能力に限界があるため、チューブ１本につき400mg以下にする。

3. サンプルゲルに対して3倍量 ( 100mg：100μℓ ) のBufferQGを添加する。

→濃度が2％以上のゲルに対しては6倍量を添加

4. 50℃で10分間 ( ゲルが完全に溶解するまで ) インキュベートする。

→時々ボルテックスにかけ、溶液を混和する

5. 溶解後、溶液の色が黄色である事を確認する。オレンジ色や紫色の時は3M酢酸ナトリウム ( pH5.0 ) を10μℓ添加し、混和する

6. ゲルと同量のイソプロパノールを添加し、混和する

7. DNAを結合させるため、付属のQIAquickスピンカラムにサンプルをアプライし、1分遠心する。

8. フロースルーを除き、QIAquickカラムを同じコレクションチューブに戻す。

9. 7.8の操作を、溶液が無くなるまで行う。

10. 500μℓのBufferQGをQIAquickスピンカラムに添加し、1分遠心する。(オプション)

11. 洗浄のため、750μℓのBufferPEをQIAquickカラムに添加し、1分遠心する。

12. 残留エタノール除去のため、フロースルー液を除き、QIAquickカラムをさらに13000rpm ( ~17900g ) で1分間遠心する。

13. QIAquickカラムを新しい1.5μℓチューブにセットする。

14. DNAを溶出するために、25μℓのBufferEBをメンブレンの中央にアプライし、1分間放置する。

15. 15000rpm、1min,RTで遠心する。