GAP repair cloning

1. YPAD3mlで一晩培養する。

2. 前培養液1mlを10mlのYPADに植菌する。

3. 30℃,90rpmで振とう培養する(3〜5時間)。対数増殖期（OD0.4-0.8）で培養をとめる。

4. 2000rpm　2min　RT

5. 上清を捨て25mlの滅菌水でリンス。

6. 2000rpm　2min　RT

7. 1.0mlの酢酸リチウム(0.1M)に溶かし、1.5mlチューブに移す。

8. 12000rpm　RT　5sec遠心し上清を除く。

9. 400ulの酢酸リチウム(0.1M)に懸濁する。

10. 50μlづつ分注し、遠心して上清を除く。

11. 50%PEG(w/v)　　　　 　240μl

1M酢酸リチウム　　　 36μl

ssDNA(2.0mg/ml)　 25μl

DNA溶液　　　　　 　50μl（5-10ng）

12. 30℃　30分

13. DMSOを40μl加え、ゆっくり攪拌する。

14. 42℃で20分間静置する。3-5分おきに軽く攪拌する。

15. 遠心後上清を捨て、YPDAで洗浄し、上清を捨てる。

16. 1mlのYPADを加え、30℃で1時間。

17. 遠心後　滅菌水で懸濁し培地にまく。