大腸菌ホストの取り扱い方

1. 当研究室で保有している大腸菌ホスト（2009年4月10日現在）

DH5α

2. 菌体の保存と使用

LB培地１Lあたり

トリプトトン 　　　　　　　10g

イーストエクストラクト　　　　5g

NaCl　　　　　　　　　　　　10g

NaOHでpH7.2〜7.5にした後、オートクレーブ

LA培地

LB　　　　　　　　　　　　　　1L

100mg/mlアンピシリン溶液を　1ml

TB培地1Lあたり

トリプトン　　　　　　　　　12.0g

イーストエクストラクト　　　24.0g

K₂HPO₄ 9.4g

KH₂PO₄ 2.2g

Glycerol　　　　　　　　　　 4 ml

SOB培地１Lあたり

Bacto Tryptone　　　　　　　　20g

Yeast Extract　　　　　　　　　 5g

5M NaCl 　　　　　　　　　　 2 ml

2M KCl 1.25 ml

60℃以下に冷めてから1M M MgSO4 を1/100量、1M MgCl2を1/100量加える。

SOC培地１Lあたり

SOB培地1 literに10 mlの2M グルコース溶液を加える。冷蔵保存し無菌的に利用する。

★アガーを加える場合(1Lあたり)

15g　(1.5％)

3. 保存法と使用法

各菌体に適した培地3mlで一晩培養した菌体を集菌し、800μlの同一の培地で懸濁してマイクロチューブに移す。これに200μlのグリセロールを加えてよく混合し、−80℃で保存する。半永久的に保存できる。

　使用に際しては、よく焼いた白金耳を直接ストックチューブに刺し、凍結金の塊をかきとって、画線培養を行い、増殖してきた菌を用いてコンピテントセルの調整などを行う。